Информационный материал.

Холодильник.

Употребляется для хранения культур микробов, иммунобиологических препаратов.

Центрифуга.

Употребляется для разделения жидкостей с различной плотностью, для получения сыворотки крови, для разделения жестких тел от жидкостей.

Сушильный шкаф.

Имеет несколько температурных режимов. Применяется для сушки лабораторной посуды.

Бактериоскопический способ состоит в. исследовании микробов под микроскопом. Исследованию могут подвергаться как мельчайшие Информационный материал. организмы в живом состоянии, так и убитые окрашенные микробные клеточки.

Методические указания:

Изготовление препаратов для микроскопичного исследования.

Для изготовления продукта исследуемый материал берут из пробирки либо чашечки Петри бактериологической петлей либо стерильной пипеткой.

Петлю прокаливают в пламени спиртовки. Вращательным движением вынимают из пробирки пробку и обжигают край пробирки. Вводят петлю в Информационный материал. пробирку, охлаждая ее о внутреннюю поверхность стекла, захватывают материал. После изготовления продукта петлю прожигают в пламени спиртовки.

Изготовление фиксированных препаратов-мазков.

1.Для изготовления продукта подготавливают предметное стекло, обезжиривая его.

2.На обезжиренное предметное стекло наносят взвесь микробов и умеренно распределяют ее по поверхности стекла.

3.Мазок высушивают на Информационный материал. воздухе либо в пламени спиртовки.

4.Высушенные мазки подвергают фиксации, в итоге которой бактерии гибнут и прикрепляются к поверхности стекла. Обычно для фиксации мазка предметное стекло проводят пару раз через пламя горелки. Время от времени мазки фиксируют хим методом ( спиртами, консистенцией Никифорова и т.д.).

Этапы изготовления фиксированного мазка:

1.Подготовка Информационный материал. предметного стекла

2.Изготовление мазка

3.Высушивание микропрепарата

4.Фиксация микропрепарата

Расцветка продукта обычным методом.

1.Фиксированный мазок помещают на «салазки» в кювету, дают ему остыть.

2.Наносят на него пипеткой несколько капель красителя на 2-3 мин.

3.Смывают краситель водой.

4. Высушивают продукт фильтровальной бумагой.

Морфология микробов – размер, форма и обоюдное размещение бактериальных клеток

Схема описания морфологии микробов в мазке:

1. Форма

2. Размеры

3. Нрав концов ( для палочек Информационный материал. )

4. Взаиморасположение

Изготовление нативных препаратов для прижизненного исследования микробов.

Способ «висячей» капли.

1. На покровное стекло наносят каплю исследуемого материала.

2. Предметное стекло с лункой, края которой за ранее смазывают вазелином, придавливают к покровному стеклу так. Чтоб капля находилась в центре лунки.

3. Переворачивают продукт покровным стеклом ввысь. В готовом препарате капля Информационный материал. должна висеть над лункой, не касаясь ее дна.

Для микроскопии сначала употребляют объектив малого роста, находят край капли, а потом устанавливают иммерсионный объектив и изучат продукт, определяя подвижность микробов.

Способ «раздавленной» капли.

На поверхность обезжиренного предметного стекла наносят каплю исследуемого материала и покрывают ее покровным стеклом. Капля не должна выходить за Информационный материал. границы покровного стекла. Раздавленную либо висящую каплю, микроскопируют при помощи с иммерсионной систе­мы в затемненном поле зрения — при суженной диафрагме и опущенном конденсоре.

Рекомендуется их микроскопировать в микроскопе с темным полем зрения.

Контрольные вопросы:

1. Что изучает мед микробиология?

2. Какие виды лабораторий есть?

3. Назовите главные виды микроскопов, применяемых для Информационный материал. работы разных лабораторий.

4. Что такое морфология микробов?

5. Назовите главные морфологические формы микробов.

6. Почему разрешающая способность иммерсионного объектива выше, чем сухого?

7. Назовите этапы изготовления мазка для иммерсионной микроскопии.

8. Зачем нужна фиксация мазка?

9. Какова последовательность обычной расцветки продукта микробов?

Д. З. Заполнить таблицу:

Отличительные черты прокариот от эукариот

признак Прокариоты эукариоты
Мезосомы Информационный материал.
Анаэробный процесс
Фиксация азота
Мембранные структуры
Органеллы движения
Генетический материал
Размещение
Форма
Внехромосомная ДНК
Гистоны
Тип деления
Синтез белка
рибосомы
Место синтеза
Клеточная стена
Структурные элементы
Стеролы

Перечень литературы:

Неотклонимая:

1.Борисов Л.Б,, Смирнова А.М., Мед микробиология, вирусология, иммунология, М., Медицина. 1994 г.

2.Борисов Л.Б. Управление к Информационный материал. практическим занятиям по микробиологии. М. 1997 г.

3.Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбакова А.М. Микробиология. М., Медицина. 1998 г.

4.Коротяев А.И., Бабичев С.А. СпецЛит. 2000 г.

Дополнительная:

1. Генкель П.А., Микробиология с основами вирусологии. М.,1974 г.

2. Тимаков В.Д., Левашов В.С., Борисов Л Информационный материал..Б. Микробиология. М. 1983 г.

3. Шлегель Г. Общая микробиология. М., 1982 г.

Занятие № 2 Морфология микробов. Тинкториальные характеристики микробов. Расцветка по способу Грама.

Цель: Научиться окрашивать мазки по способу Грама и учить морфологические и тинкториальные характеристики микробов

Знать: Особенности морфологии бактериальных клеток. Методику окрашивания по способу Грама.

Уметь: Приготовить мазок, окрасить его, выполнить Информационный материал. микроскопию при помощи иммерсионного микроскопа, обрисовать морфологию и отдельные особенности ультраструктуры клеток микробов.

Обоснование темы: Морфология бактериальной клеточки имеет принципиальное значение для систематизации микробов и употребляется для бактериоскопического способа диагностики неких заразных болезней

Вопросы для самоподготовки:

1. Главные морфологические группы микробов.

2. Особенности морфологии грибов, актиномицетов, риккетсий, спирохет, микоплазм и хламидий.

3. Понятие о обычных Информационный материал. и сложных способах расцветки.

4. Выявление различий в строении клеточной стены микробов при помощи расцветки по Граму.

ПЛАН

Программка:

1. Морфология бактериальных клеток.

2. Дифференциация микробов при помощи расцветки по способу Грама

3. Главные отличительные черты обычных и сложных способов окрашивания.

Демонстрация:

1. Мазок из консистенции микробов ( расцветка по способу Грама)

2. Мазки разных морфологических форм микробов Информационный материал..

Задание студентам:

1. Микроскопировать и дифференцировать бактерии по морфологическим и тинкториальным свойствам в готовом препарате из консистенции микробов (расцветка по способу Грама). Зарисовать.

2. Без помощи других приготовить мазки из культур пищеварительной палочки и стфилококка, окрасить по способу Грама, микроскопировать и дифференцировать бактерии по морфологическим признакам и тинкториальным свойствам Информационный материал.. Зарисовать.

3. Микроскопировать и зарисовать мазки разных морфологических форм микробов. Заполнить таблицу:

Главные морфологические формы микробов

Кокки Палочки Извитые Нитчатые

Информационный материал.

Морфологические формы микробов

Известны четыре главные формы микробов: шарообразная, палочковидная и извитая и нитевидная. В согласовании с этим все бактерии по форме разделяются на последующие группы:

1) кокки (шарообразные),

2) бактерии (палочковидные),

3) спириллы Информационный материал. (извитые в виде спирали)

4) актиномицеты (нитевидные)

1. Кокки — бактерии круглой формы, имеющие в поперечнике 1—2 мкм. Они различаются меж собой по обоюдному расположению отдельных клеток, которое находится в зависимости от метода их деления. Если по окончании деления кокки разъединяются на отдельные шарики, выходит форма микрококка. Группа из 2-ух кокков носит Информационный материал. заглавие диплококка. Если деление кокков происходит в одном направ­лении и образующиеся кокки не разъединяются, то выходит цепочка из шариков. Эта форма носит заглавие стрептококка.При делении в 2-ух взаимно перпендикулярных направлениях появляются сочетания по четыре кокка — тетракокка.

Если деление происходит в 3-х взаимно перпендикулярных направлениях, кокки соединяются в виде больших Информационный материал. пакетов и получают заглавие сарцин .

Если кокки образуют скопления клеток в виде виноградовых гроздьев, они именуются стафилококками.

Не считая того, кокки могут иметь правильную круглую форму, округлую форму, ланцетовидную форму, бобовидную форму.

2. Бактерии – имеют палочковидную форму размером от нескольких толикой микрона до 1—5 мкм (различают недлинные, длинноватые, тонкие и Информационный материал. толстые палочки). Они различаются друг от друга наличием споры, ее поперечником, формой концов и т.д. Бактериями именуют палочки, которые способны создавать споры, не превосходящие в поперечнике клеточку. Клостридиями считают бактерии, способные к образованию спор, существенно превосходящих поперечник бактериальной клеточки. Палочки, не способные к спорообразованию, именуются микробами (в узеньком смысле Информационный материал. этого слова).

Бывают палочки с округленными концами, к примеру, пищеварительная палочка, с обрезанными краями (палочка сибирской язвы); с заостренными краями (фузобактерии). У коринобактерий края палочек утолщены из-за наличия в их припасов валютина.

Палочки могут размещаются одиночно, по две бактерии (диплобациллы), в виде цепочек (стрептобациллы); некие палочки располагают Информационный материал.­ся под углом (коринобактерии дифтерии ).

3. Извитые формы. Если амеба имеет один завиток спирали, она именуется вибрионом (холерный вибрион ). Длина вибрионов 1—3 мкм. Кампилобактерии имеют извивы тела, напоминающие крылья летящей чайки.

Спириллы, спиралевидные, недвижные мельчайшие организмы, имеющие более 1-го завитка, длиной от 5 до 30 мкм .

Спирохеты - подвижные, извитые формы микробов. Различают Информационный материал. последующие разновидности спирохет: трепонемы имеют 8-12 завитков, симметричны; боррелии имеют 3-8 больших завитка, не симметричны и лептоспиры, симметричные мельчайшие организмы имеющие более 10 маленьких завитков и 2 больших извива на концах клеточки, напоминающие буковку S либо C.

Методические указания:

Сложные способы расцветки употребляют для выявления разных компонент бактериальных клеток и для дифференциации микробов зависимо от Информационный материал. хим состава и ультраструктуры. Для сложных способов окрашивания в отличии от обычных употребляется более 2-ух разных красителей, один из которых является главным а другой дополнительным.

Расцветка по способу Грама:

1. На фиксированный мазок нанести основной краситель – генциановый фиолетовый через полоску фильтровальной бумаги. Выдержать 2 мин.

2. Не промывая мазок Информационный материал., нанести раствор Люголя на 1 мин.

3. Обесцветить этиловым спиртом 5-10 сек.

4. Помыть водой.

5. Нанести раствор аква фуксина на 1-2 мин.

6. Помыть водой, высушить.

Грамположительные бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет, грамотрицательные в красноватый. Принцип способа состоит в том что генциановый фиолетовый связывается с пептидогликаном клеточной стены. Большой слой пептидогликана грамположительных микробов связывает много красителя Информационный материал.. Узкий слой – грамотрицательных – не много. Раствор Люголя фиксирует краситель за счет образования комплекса краситель-пептидогликан-йод. При обработке мазка спиртом грамотрицательные мельчайшие организмы стремительно теряют краситель и обесцвечиваются. А грамположительные микрооганизмы остаются окрашенными в сине-фиолетовый цвет. Дополнительный краситель окрашивает грамотрицательные мельчайшие организмы в красноватый цвет.

Расцветка по Граму имеет дифференциально Информационный материал.-диагностическое значение. К грамположительным микробам относятся стафилококки, стрептококки и др., к грамотрицательным – гонококки, пищеварительная палочка, менингококки и др. Некие виды окрашиваются по Граму вариабельно зависимо от разных наружных и внутренних причин.

Для правильной расцветки следует соблюдать технику окрашивания.

Контрольные вопросы:

1.Назовите главные морфологические формы микробов.

2 Каково строение клеточной Информационный материал. стены бактериальной клеточки?

3.Каковы главные отличительные признаки Гр(-) и Гр(+) микробов?

4. Каково значение сложных способов окрашивания при диагностике заразных болезней?

5. Назовите последовательность операций при расцветке микробов по способу Грама.

Д.З. Заполнить таблицу

Структура бактериальной клеточки

органоид Функция Способы выявления

Перечень литературы:

Неотклонимая:

1. Борисов Л.Б., Смирнова А.М., Мед микробиология Информационный материал., вирусология, иммунология. М., медицина. 1994 г.

2. Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбакова А. М. Микробиология. М., Медицина. 1998 г.

3. Коротяев А. И., Бабичев С. А., Мед микробиология , вирусология , иммунология. СпецЛит, 2000 г

4. Борисов Л. Б. Управление к практическим занятиям по микробиологии. М. 1973 г.

Дополнительная:

1. Пяткин К.Н Информационный материал.., Кривошеин Ю.С. Микробиология. М., 1980 г.

2. Генкель П.А., Микробиология с основами вирусологии. М., 1974 .

3. Шлегель Г. Общая микробиология. М., Мир, 1982 г.

Занятие № 3 Строение бактериальной клеточки. Сложные способы расцветки.

Цель: Изучить строение бактериальной клеточки, функции и способы выявления отдельных органоидов. Научиться окрашивать мазки по способу Циля-Нильсена, Бурри и Бурри-Гинса Информационный материал., Нейссера, Ожешко.

Знать: Особенности морфологии и ультраструктуры бактериальных клеток.

Уметь: Приготовить мазок, окрасить его сложным способом, выполнить микроскопию при помощи иммерсионного микроскопа, обрисовать морфологию и отдельные особенности ультраструктуры клеток микробов.

Обоснование темы: Строение бактериальной клеточки имеет принципиальное значение для систематизации микробов и употребляется для бактериоскопического способа диагностики неких заразных Информационный материал. болезней

Вопросы для самоподготовки:

1. Отличительные черты клеток прокариотов от клеток эукариотов.

2. Облигатные составляющие клеток прокариотов

3. Факультативные составляющие клеток прокариотов.

4. Способы исследования структуры бактериальных клеток и их практическое значение.

5. Бактериоскопический способ диагностики. Его плюсы и недочеты.

ПЛАН

Программка:

1. Ультраструктура бактериальных клеток

2. Дифференциация микробов при помощи расцветки по способу Грама

3. Сложные способы расцветки (способы Ожешко, Циля-Нильсена, Бурри Информационный материал.-Гинса, Нейссера )

Демонстрация:

1. Капсула микробов (расцветка по способу Бурри-Гинса)

2. Кислотоустойчивые микобактерии туберкулеза в мокроте (расцветка по способу Циля-Нильсена)

3. Спорообразующие бактерии (расцветка по способу Ожешки)

4. Зерна волютина у коринебактерий дифтерии (расцветка по способу Нейссера)

Задание студентам:

1. Микроскопировать и дифференцировать бактерии по морфологическим и тинкториальным свойствам в Информационный материал. готовом препарате (расцветка по способу Грама). Зарисовать.

2. Без помощи других приготовить мазки из культур пищеварительной палочки и стфилококка, окрасить по способу Грама, микроскопировать и дифференцировать бактерии по морфологическм признакам и тинкториальным свойствам. Зарисовать.

4. Микроскопировать и зарисовать:

- капсулы клебсиелл (расцветка по способу Бурри и Бурри-Гинса)

- коринебактерии дифтерии, содержащие зерна Информационный материал. валютина (расцветка по способу Нейссера)

- кислотоустойчивые микобактерии (расцветка по способу Циля-Нильсена)

- споры бацилл сибирской язвы (расцветка по способу Ожешки)

Информационный материал.

Сложные способы расцветки употребляют для выявления разных компонент бактериальных клеток и для дифференциации микробов зависимо от хим состава и ультраструктуры. Для сложных способов окрашивания в отличии от обычных употребляется Информационный материал. более 2-ух разных красителей, один из которых является главным а другой дополнительным.

В бактериальной клеточке имеются облигатные органоиды, к которым относят клеточную стену, цитоплазматическую мембрану, цитоплазму, нуклеоид, рибосомы, мезосомы и факультативные органоиды: капсула, жгутики, фимбрии, пили, споры, плазмиды, включения.

Нуклеоид микробов представлен двунитчатой ДНК, замкнутой в кольцо и размещен Информационный материал. в центре клеточки. Основными различительными чертами ядерной субстанции микробов от эукариотических клеток являются:

1. Отсутствие ядерной оболочки

2. Отсутствие ядрышка

3. Отсутствие гистонов

Для обнаружения бактериального ядра нужно применение электрической микроскопии либо применение расцветки по методу Фельгена либо по Романовскому-Гимза.

Цитотоплазма микробов состоит из растворимых белков. Рибосомы микробов состоят из 2-ух субъединиц Информационный материал. и имеют коэффициент седиментации 70S. В циотоплазме неких микробов имеются припасы питательных веществ в виде включений, которые можно найти с помощью разных способов окрашивания. К примеру, в цитоплазме у С. diphtheriae находятся зерна волютина, они являются включениями фосфатов и имеют в отличие от цитоплазмы щелочную реакцию. Для выявления зернышек волютина используют Информационный материал. расцветку по способу Нейссера.

Клеточная стена микробов присваивает им определенную форму, участвует в процессах обмена веществ и деления клеточки.

У микробов можно выявить присутствие клеточной стены при помощи электрической микроскопии, при окрашивании по способу Грама, Циля-Нильсена.

Клеточная стена грамположительных микробов существенно толще, чем у грамотрицательных, в ней содержится Информационный материал. существенное количество пептидогликана (40-90%) связанного с тейхоевыми кислотами. У грамотрицательных микробов содержание пептидогликана не превосходит 10%.

Цитоплазматическая мембрана участвует в регуляции осмотического давления, в процессах обмена и транспорта веществ. Она окружает наружнюю часть цитоплазмы и состоит из двойного слоя липидов со встроенными поверхностными и интегральными белками. Цитоплазма способна создавать особенные впячивания Информационный материал., которые получили заглавие мезосом. Мезосомы учавствуют в делении клеточки, в процессе спорообразования, в синтезе неких веществ.

Капсула размещена снаружи клеточной стены, представляет собой слизистое образование, состоящее из полисахаридов либо полипептидов. Она имеет защитное значение, у патогенных микробов капсула появляется в большинстве случаев снутри человеческого организма либо животного и Информационный материал. препятствует фагоцитозу, увеличивает устойчивость к действию антител.

Некие бактерии (к примеру, клебсиеллы, псевдомонады) образуют капсулу и в организме хворого, и на питательной среде, где они дают большие, слизистые колонии.

Капсула выявляется при особых способах расцветки.

Споры образуются при неблагоприятных критериях наружной среды (Вас. аnthracis, С. tetani). Спорообразование содействует сохранению Информационный материал. вида и не является методом размножения. У клостридий спора превосходит поперечник клеточки, у бацилл – нет. Форма спор может быть округлой либо округленной. У С. Tetani споры размещены терминально, вам. Аnthracis типично центральное размещение спор. Споры химически инертны, потому окрашиваются с трудом. Для выявления этих структур употребляют расцветку Информационный материал. по способу Ожешки.

Жгутики имеются у подвижных микробов. Они состоят из белка флагеллина. Оределение подвижности микробов имеет диагностическое значение. По числу жгутиков и их расположению бактерии делятся на монотрихи, имеющие один жгутик, лофотрихи с пуч­ком жгутиков на одном конце клеточки, амфитрихи имеют жгутики на обоих концах, и перитрихи Информационный материал., у каких жгутики размещены вокруг тела.

Жгутики можно найти при электрической микроскопии после обработки томными металлами либо в световом микроскопе после расцветки по способу Леффлера, серебрения по Морозову.

Фимбрии и пили представляют собой нитевидные образования, расположенные на поверхности бактериальной клеточки, состоящие из белка пилина. Существует несколько разновидностей фимбрий, которые Информационный материал. отличаются друг от друга по выполняемым функциям: адгезия, питание, водно-солевой обмен. Пили участвуют в процессе конъюгации и образуются мужскими клетками-донорами.

Бактериоскопический способ диагностики основан на выявлении возбудителей заразных болезней в исследуемом материале по морфологическим, тинкториальным свойствам по обоюдному расположению с применением разных способов расцветки либо в нативном Информационный материал. состоянии.

Сфера внедрения: способ употребляется для диагностики болезней, возбудители которых владеют соответствующими морфологическим, тинкториальными, качествами и обычной локализацией в организме, К примеру: гонорея, сифилис, возвратимый тиф, туберкулез, неких микозы.

К плюсам способа относятся быстрота, доступность, экономичность. К недочетам способа относятся недостающая информативность, низкая чувствительность, невозможность дифференциации снутри вида.

Методические указания Информационный материал.:

Для выявления зернышек волютина используют расцветку по способу Нейссера.

Расцветка зернышек волютина по способу Нейссера:

1. На фиксированный мазок нанести уксуснокислый метиленовый голубий Нейссера на 2-3 мин.

2. Помыть водой.

3. Нанести дополнительный краситель - везувин.

4. Помыть водой, высушить.

При расцветке появляется нерастворимый в воде комплекс: краситель-валютин. При промывке водой тело микробной клеточки обесцвечивается, а Информационный материал. гранулки валютина сохраняют голубую расцветку. Тело клеточки потом окрашивается везувином в желтоватый цвет.

Расцветка кислотоустойчивых микробов по способу Циля-Нильсена:

1. На фиксированный мазок нанести нанести фильтровальную бумагу, пропитанную карболовым фуксином Циля и прогреть в течение 3-5 мин.

2. Помыть водой.

3. Нанести 5% раствор серной кислоты на 1-2 мин для обесцвечивания Информационный материал..

4. Помыть водой.

5. Докрасить мазок веществом метиленового голубого 3-5 мин.

6. Помыть водой, высушить.

В базе способа лежат разрыхление клеточной стены микробов для усиления поглощения красителя и избирательное обесцвечивание под действием кислоты. Кислотоустойчивые бактерии отличаются высочайшим содержанием липидов в клеточной стене. Они с трудом окрашиваются, но потом задерживают основной краситель при обесцвечивании кислотой. Некислотоустойчивые Информационный материал. бактерии окрашиваются дополнительным красителем.

Расцветка капсул по способу Бурри-Гинса:

1. Смешать каплю взвеси микробных клеток с каплей туши и с помощью стекла сделать мазок.

2. На мазок нанести аква раствор фуксина на 1-2 мин.

3. Помыть водой, высушить.

Бактерии окрашиваются в красноватый цвет, капсулы не окрашиваются и остаются прозрачными на черном Информационный материал. фоне туши.

Расцветка спор по способу Ожешко:

1. Протравливание мазка 0,5 % веществом соляной кислоты 2-3 мин при нагревании.

2. Помыть водой.

3. Окрасить по способу Циля-Нильсена.

Способ Ожешко сходен с способом Циля-Нильсена, но отличается внедрением раствора соляной кислоты в качестве протравы, разрыхляющей оболочку споры, которая плохо принимает красители. В итоге окрашивания споры микробов Информационный материал. получают красноватый цвет, а вегетативные формы – голубий.

Контрольные вопросы:

1. Какое строение и функции имеет нуклеоид бактериальной клеточки?

2. Какое значение в жизни микробов имеют плазмиды?

3. Каково строение спор микробов?

4. Назовите последовательность операций при расцветке микробов по способу Циля-Нильсена, Бурри, Ожешки, Нейссера.

5. При помощи какого способа расцветки может быть найти капсулы Информационный материал. у микробов?

Перечень литературы:

Неотклонимая:

1. Борисов Л.Б., Смирнова А.М., Мед микробиология, вирусология, иммунология. М., медицина. 1994 г.

2. Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбакова А. М. Микробиология. М., Медицина. 1998 г.

3. Коротяев А. И., Бабичев С. А., Мед микробиология , вирусология , иммунология. СпецЛит, 2000 г

4. Борисов Информационный материал. Л. Б. Управление к практическим занятиям по микробиологии. М. 1973 г.

Дополнительная:

1. Пяткин К.Н., Кривошеин Ю.С. Микробиология. М., 1980 г.

2. Генкель П.А., Микробиология с основами вирусологии. М., 1974 .

3. Шлегель Г. Общая микробиология. М., Мир, 1982 г.

Занятие № 4 Физиология микробов.Бактериологический способ диагностики.питание микробов. Питательные среды. Способы выделения незапятнанных культур микробов.

Цель Информационный материал.: Научиться выделять чистую культуру микробов, учесть рост микробов на плотных и водянистых питательных средах.

Знать: Схему бактериального способа диагностики заразных болезней, особенности и систематизацию питательных сред, особенности питания микробов.

Уметь: Обрисовывать культуральные характеристики микробов, выделять незапятнанные культуры при помощи механических способов.

Обоснование темы: Бактериологический способ является главным способом Информационный материал. диагностики заразных болезней, для его постановки нужны сведения о главных питательных потребностях микробов и критериях их культивирования.

Вопросы для самоподготовки:

1. Особенности бактериологического способа диагностики, его плюсы и недочеты.

2. Питание микробов. Потребности в питательных субстанциях.

3.Требования, предъявляемые к питательным средам.

4. Систематизация питательных сред.

5. Способы выделения незапятнанных культур микробов.

ПЛАН

Программка:

1. Метаболизм аэробных Информационный материал. и анаэробных микробов.

2. Питательные среды, используемые для культивирования.

3. Понятие о незапятанной культуре и способы ее выделения.

Демонстрация:

1. Готовые питательные среды: мясо-пептонный агар, мясо-пептонный бульон, среда Эндо, желточно-солевой агар, солевой бульон, селенитовый бульон, среда Плоскирева.

2. Техника посева исследуемого материала петлей и шпателем на чашечку Петри Информационный материал. с плотной питательной средой с целью получения изолированных колоний.

Задание студентам:

1.Ознакомиться с питательными средами, их предназначением: мясо-пептонный бульон (МПБ), мясо-пептонный агар (МПА), среда Эндо, среда Плоскирева, желточно-солевой агар ЖСА, солевой бульон (СА) селенитовый бульон и основными инградиентами для их производства.

2. Обрисовать нрав роста микробов на плотной питательной среде Информационный материал., оценить культуральные характеристики микробов

3.Обрисовать нрав роста микробов на водянистых питательных средах.

4. Выполнить 1 шаг выделения незапятанной культуры аэробов из исследуемого материала и наметить ход предстоящего исследования. Выполнить посев инокулята по способу Дригальского. Выполнить посев инокулята истощающим штрихом.

6. Заполнить таблицу. Способы выделения незапятнанных культур микробов.

Информационный материал.

Главные среды:

Пептонный Информационный материал. бульон. Выпускается в сухом виде, состоит из триптического гидролизата кильки хлорида натрия.

Питательный агар. Состав: ферментативный гидролизат кормовых дрожжей, агар, хлорид натрия.

Элективные питательные среды.

Желточно-солевой агар. Содержит 8-10% хлорида натрия, который не препятствует росту стафилококков и питательную базу с лецитином, при расщеплении которого вокруг колоний появляется перламутровый венчик преципитата Информационный материал..

Дифферинциально-диагностические среды.

Среда Эндо - уплотненная, непростая питательная среда, по систематизации сред относится к дифференциально-диагностическим. Применяется для посева и выделения энтеробактерий. До посева имеет розоватый цвет.

Состав: МПА - питательная база; лактоза - дифференциальный фактор; фуксин, нейтрализованный гипосульфитом - индикатор на РН.

Механизм работы среды - если выросшие мельчайшие Информационный материал. организмы расщепляют лактозу, среда закисляется, РН изменяется в кислую сторону, колонии будут окрашенными в тёмнокрасный цвет время от времени с железным блеском. Так смотрятся на этой среде колонии пищеварительной палочки. Шигеллы, сальмонеллы не расщепляют лактозу и потому их колонии покрашены в цвет среды.

Среда Плоскирева - уплотненная, непростая питательная среда, по систематизации сред Информационный материал. относится к элективно-дифференциальным. Применяется для выделения патогенных энтеробактерий. До посева имеет цвет обыденного МПА.

Состав: МПА - питательная база; соли желчных кислот - элективный фактор; лактоза - дифференциальный фактор; нейтральный красноватый - индикатор на РН.

Механизм работы среды - соли желчных кислот подавляют рост непатогенных энтеробактерий (они могут расти на этой среде, но Информационный материал. не через 24 часа, а позднее - через 48); если бактерии расщепляют лактозу, колонии будут покрашены в красноватый цвет. Шигеллы, сальмонеллы не расщепляют лактозу и потому их колонии покрашены в цвет среды.

Среда ЖСА (желточно-солевой агар) - уплотненная, непростая питательная среда, по систематизации сред относится к элективно-дифференциальным. Применяется для выделения Информационный материал. стафилококков.

Состав: МПА - питательная база; 10% NaCl - элективный фактор; лецитин куриного желтка – дифференциальный фактор.

Механизм работы среды - 10% NaCl подавляют рост других бактерий, потому на ней растут в большей степени стафилококки; если стафилококки продуцируют фермент лецитовителлазу, расщепляющий лецитин, вокруг таких колоний возникает зона помутнения. В большинстве случаев так смотрятся Информационный материал. на ЖСА колонии Staphylococcus aureus.

Требования к питательным средам:

1. Среды должны быть питательными, т.е. содержать все нужные для жизнедеятельности вещества: источники азота, углерода, водорода и кислорода, минеральные соли, причины роста для ауксотрофных микробов.

2. Среды должны быть изотоничными, т.е. осмотическое давление в среде должно быть таким же как и Информационный материал. снутри клеточки, зачем в среду добавляют 0,5 % NaCl.

3. Среды должны быть стерильными для обеспечения способности выделения незапятанной культуры

4. Среды должны содержать достаточное количество доступной воды т.к. бактерии питаются по законам осмоса и диффузии.

5. Среды должны владеть определенным ОВП, т.е. соотношением веществ, отдающих и принимающих.

6. Среды должны быть прозрачными – удобнее смотреть Информационный материал. за ростом культур.

7. Среды должны быть по способности унифицированными по содержанию главных компонент: содержание аминного азота, общего азота, содержание хлоридов, пептона.

Культуральные характеристики микробов – особенности роста микробов на плотной питательной среде.

Бактериологический способ – основной способ диагностики заразных болезней. Содержит в себе посев исследуемого материала на питательные среды Информационный материал., выделении незапятанной культуры и ее идентификацию( посев на плотные питательные среды, на водянистые питательные среды, определение морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических, антигенных, параметров, чувствительности к лекарствам, количества микробов в исследуемом материале – определение вида и штамма мельчайшего организма.)

Выделение незапятанной культуры база бактериологической работы, т. к. в процессе деятельности приходится иметь дело Информационный материал. с материалом, содержащим смесь микробов, а идентификация вида вероятна тогда, когда бактерии получены в чистом, изолированном виде.

Для получения незапятанной культуры нужно отделить клеточки различных видов друг от друга. По методу их отделения различают две главных группы способов выделения незапятнанных культур:

1. Способы, основанные на механическом разделении.

2. Способы, основанные на различиях Информационный материал. в био свойствах.

В большинстве случаев употребляют механические методы разъединения бактериальных клеток - особые способы посева.

Техника посева материала на плотную питательную среду.

Получение изолированных колоний. Образование изолированных колоний достигается методом механического рассредотачивания бактерий при посеве. Существует несколько методов посева материала.

Посев по способу Дригальского делается шпателем в Информационный материал. чашечку Петри на плотную питательную среду. За ранее в центр среды петлей заносят каплю исследуемой культуры, а потом растирают по всей поверхности при помощи стерильного шпателя.

Посев истощающим штрихом создают петлей, за ранее разделив чашечку Пери на 4 равных квадрата. Посев начинают с 1 квадрата параллельными штрихами и кончают в 4 квадрате.

Получение сливного Информационный материал. роста можно использовать для скопления приобретенной культуры . В пробирку со скошенным агаром заносят петлю с материалом и создают посев зигзагом, двигаясь снизу ввысь.

Ко 2-ой группе способов получения незапятнанных культур микробов относятся:

а) фильтрация. Исследуемый материал пропускают через особые фильтры с определенным поперечником пор и таким макаром делят мельчайшие Информационный материал. организмы по величине (к примеру, для чистки вирусов от микробов)

Био способы выделения основаны на различиях в био свойствах микробов.

а) способ Шукевича – исследуемый материал засевают в конденсационную воду скошенного агара, при всем этом подвижные формы микробов при размножении «выползают» на поверхность агара из конденсационной воды (Proteus vulgaris).Отсевая верхний Информационный материал. край культуры в воду свежескошенного агара и повторяя эту манипуляцию пару раз, можно получить чистую культуру.

б) способ прогревания – прогревают материал до 800С на водяной бане 10-15 мин., при всем этом вегетативные формы гибнут, а споры остаются и при посеве на питательную среду прорастают ( способ позволяет отделить споровые культуры от Информационный материал. неспоровых)

в) способ остывания – выкармливание микробов при низких температурах. Используют для выделения незапятнанных культур психрофильных микробов (мельчайшие организмы рода Yersinia выращивают при температуре 50 С)

г) бактериостатический способ при посеве в начальный материал добавляют некие хим вещества либо лекарства, которые угнетают рост одних микробов, не влияя на Информационный материал. других (пенициллин задерживает рост Гр+ микробов, не влияя на ГР-, 5% Н2SO4 убивает большая часть микробов, исключая кислотоустойчивых (возбудитель туберкулеза)

д) способ обогащения посев на элективные среды

е) инфецирование лабораторных животных.

Методические указания:

Схема описания культуральных параметров микробов:

1.Форма колонии

2.Размер колонии

3.Цвет

4.Нрав края

5.Нрав поверхности

6. Смесь

Посев по способу Дригальского.

1.Приготовить 3 чашечки Петри со Информационный материал. стерильной питательной средой.

2. В центр среды петлей заносят 1 каплю исследуемой культуры.

3. Умеренно растирают каплю шпателем по поверхности питательной среды в чашк


informacionnij-byulleten-podgotovlen-analiticheskim-otdelom-kurganskoj-oblastnoj-dumi-na-osnove-materialov-kurganskoj-oblastnoj-dumi-i-obshestvennoj-molodyozhnoj-palati-pri-kurganskoj-oblastnoj-dume-stranica-2.html
informacionnij-byulleten-pravovogo-otdela-gu-mvd-rossii-po-samarskoj-oblasti-monitoring-novogo-zakonodatelstva-po-sostoyaniyu-na-maj-2013-goda.html
informacionnij-byulleten-profsoyuza-2101-2010-g-stranica-9.html